بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوسالهها و بزهاي كشتارشده به روش PCR مقدمهعفونت پلوروپنوموني واگير، بيماري تحليل برنده تنفسي است كه با جاي گرفتن در طبقهبندي بيماريهاي سازمان جهاني كنترل بيماريهاي واگير، لزوم و اهميت شناسايي آن مشخص شده است. عامل اصلي اين بيماري، گونه مايكوپلاسما مايكوئيدس ميباشد كه تايپ كلوني كوچك آن بطور اختصاصي به گلههاي گاو، خسارات فراواني ناشي از همهگيري گسترده و مرگ و مير فراوان تحميل كرده است.تايپ كلوني بزرگ اين گونه همراه با دو گونه ديگر بنامهاي مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم و مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپريفرم غيركلاسيك پلوروپنوموني واگير را در گلههاي گوسفند و بز بوجود آوردهاند. اين بيماري در فرم كلاسيك، که عامل آن مايکوپلاسما کاپري کولوم کاپري پنوموني شناخته ميشود، خسارات اقتصادي سهمگيني در گلههاي بز و گوسفند موجب گرديده است.از آنجائيكه منطقه خاورميانه جزو مناطق مشكوك به آلودگي پلوروپنوموني واگير محسوب ميشود، حفظ وضعيت عاري بودن از عفونت در اين منطقه، مشكل يا تقريبا غيرممكن بوده و نيازمند بازنگري درراهبردهاي بكار رفته به منظور تشخيص و كنترل اين عفونتهاست. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك تشخيصي و پاتولوژيكي، مسير بيماريزايي ناشناخته و تنوع فنوتيپي بسيار پيچيده ارگانيسم در مواجهه با دستگاه ايمني ميزبان، بر مشكل شناسايي آن افزوده است. علاوه بر اين ، ابقا طولاني مدت باکتري در محل عفونت و وجود ناقلين بدون علامت، برنامه كنترل بيماري را با چالش روبرو كرده است.از اين رو، شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي و تفريقي گونههاي كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس كه هركدام استراتژي جداگانه اي در برخورد با عفونت گلهها دارند، از اهميت ويژهاي برخوردار است. تعداد صفحات 176 word فهرست الف- مقدمهب-چکيده1- تاريخچه2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما.............................................................. 63- مقاومت مايکوپلاسماها........................................................... 84- طبقه بندي مايکوپلاسماها................................................................... 95- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس................................................................. 126- فيلوژني ....................................................................... 147- ساختمان 151-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس ................................................. 152-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم ........................................................ 178- بيولوژي مولکولي.......................................................................... 199- تواليهاي تکراري............................................................. 2310- پروتئينهاي سطحي....................................................................... 2511- فاکتور حدت 3012- آناليز پروتئين ............................................................................. 3213- طبقه بندي سويهها .................................................................... 3414- مشخصات گونه مايکوئيدس...................................................... 3515- کشت و رشد گونه مايکوئيدس ................................................................................ 3816- کشت و رشد گونه کاپري کولوم ........................................................................ 411-16- محيط Thiacourt ....................................................................... 4117- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان................................................................. 441-17- علائم باليني ................................................................................. 452-17- علائم کالبدگشايي بيماري ........................................................................................................ 473-17- پاتوژنز 501-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني............................................................................................ 534-17- اختصاصيت ميزبان..................................................................................... 575-17- انتقال بيماري ......................................................................................... 586-17- سير همه گيري ...................................................................... 591-6-17- مخزن 59...................................................................................2-6-17- راه انتقال................................................................... 597-17- پيشگيري و کنترل..................................................................... 601-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري........................................................................... 612-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري.............................................................................................. 623-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي........................................................................................... 6318- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان .................................................................................................. 631-18- علائم باليني .............................................................................. 642-18- علائم کالبد گشايي................................................................ 6619- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم........................................................ 691-19- سندروم MASKePs..................................................................... 702-19- علائم باليني.............................................................................. 713-19- علائم کالبد گشايي..................................................................... 714-19- سندروم آگالاکتيه واگير................................................................ 7320- گونه مايکوپلاسما کاپري .................................................................. 731-20- بيماريزايي ............................................................................ 732-20- علائم کالبد گشايي...................................................................... 7421- سير همهگيري.................................................................... 751-21-مخزن ....................................................................... 752-21-راه انتقال ...........................................................................3-21-جمعيت ميزبان........................................................................ 7722-پيشگيري وکنترل ..................................................................... 771-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري...................................... 772-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري....................................................................... 783-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي................................................................... 7823-واکسن ......................................................... 791-23-واکسن MmmLC ............................................................................................................ 792-23-واکسن Mccp ..................................................................... 79 25-تشخيص افتراقي................................................................ 801-25-شناسايي عامل بيماري زا ........................................................ ...... 811-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي............................ 812-25- تشخيص آزمايشگاهي ............................................................... 811-2-25- روش کشت و جداسازي......................................................... 811-1-2-25- انتخاب نمونه ها .................................................................... 822-1-2-25- آماده سازي نمونه ها .............................................................. 823-25- تستهاي بيوشيمي............................................................ 834-25- روشهاي سرولوژي.................................................................. 851-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي ...................................................... 852-4-25- تست مهاري رشد ....................................................................... 873-4-25- تست ايمونو فلورسانس .................................................................... 884-4-25- تست رسوب ژلي................................................................ ...... 885-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان ..................................................... 896-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون ..................................................................... 897-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس................................................................... 908-4-25- تست اليزاي رقابتي.................................................................... 919-4-25- ساير تستهاي تشخيصي................................................................... 945-25 - مشکلات روشهاي سنتي.......................................................................... 946-25- تشخيص با استفاده از PCR....................................................... 95فصل دوم: روش کار26- روش کار 1011-26- جمع آوري نمونه ............................................................................ 1011-1-26- مواد لازم.................................................................................. 1012-1-26- بخش جمع آوري نمونه........................................................... 1013-1-26- نمونه برداري ......................................................................... 1032-26- کشت و جداسازي نمونه ها............................................................. 1041-2-26- مواد لازم ....................................................................... 1042-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان ................. 1061-2-2-26- مواد لازم ........................................................................ 1062-2-2-26- روش تهيه محيط کشت........................................................................... 1073-26- استخراج DNA مايکوپلاسما........................................................... 1091-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي................................................... 1094-26- فرايند PCR ............................................................. 1101-4-26- مواد لازم .............................................................. 1102-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR ........................................................ 1121-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونهها ..................................................... 1122-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده................................................. 1153-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه.................................................................... 1153-4-26- پرايمرها.................................................................... 1154-26- واکنش PCR................................................................ 1175-26- تهيه ژل الکتروفورز .................................................................. 1181-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد .................................................... 1196-26- الکتروفورز .................................................................. 1217-26- رويت باندهاي ايجاد شده ..................................................................... 122 فصل سوم: نتايج27- نتايج ..................................................................... 1241-27- جداسازي 1241-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت.................................................................. 1242-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي ......................................................... 1241-2-1-27- نتايج روز پنجم ............................................................ 1252-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم............................................................... 1253-2-1-27- نتايج روزپانزدهم............................................ 1262-27- نتايج PCR1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ........................................ 1262-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده............................................ 1273-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس........................ 1274-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه..................................... 1285-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ..................... 1293-27- نتايج کالبد گشايي.......................................................................... 1301-3-27- معيار انتخاب .................................................................................. 130
پایان نامه بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم
بررسي عفونت ريوي مايكوپلاسمايي ناشي از مايكوپلاسما مايكوئيدس واريته مايكوئيدس و مايكوپلاسما كاپري كولوم واريته كاپري كولوم در گوسالهها و بزهاي كشتارشده به روش PCR مقدمهعفونت پلوروپنوموني واگير، بيماري تحليل برنده تنفسي است كه با جاي گرفتن در طبقهبندي بيماريهاي سازمان جهاني كنترل بيماريهاي واگير، لزوم و اهميت شناسايي آن مشخص شده است. عامل اصلي اين بيماري، گونه مايكوپلاسما مايكوئيدس ميباشد كه تايپ كلوني كوچك آن بطور اختصاصي به گلههاي گاو، خسارات فراواني ناشي از همهگيري گسترده و مرگ و مير فراوان تحميل كرده است.تايپ كلوني بزرگ اين گونه همراه با دو گونه ديگر بنامهاي مايكوپلاسما كاپري كولوم كاپري كولوم و مايكوپلاسما مايكوئيدس كاپريفرم غيركلاسيك پلوروپنوموني واگير را در گلههاي گوسفند و بز بوجود آوردهاند. اين بيماري در فرم كلاسيك، که عامل آن مايکوپلاسما کاپري کولوم کاپري پنوموني شناخته ميشود، خسارات اقتصادي سهمگيني در گلههاي بز و گوسفند موجب گرديده است.از آنجائيكه منطقه خاورميانه جزو مناطق مشكوك به آلودگي پلوروپنوموني واگير محسوب ميشود، حفظ وضعيت عاري بودن از عفونت در اين منطقه، مشكل يا تقريبا غيرممكن بوده و نيازمند بازنگري درراهبردهاي بكار رفته به منظور تشخيص و كنترل اين عفونتهاست. عدم برخورداري از خصوصيت پاتوگونوميك تشخيصي و پاتولوژيكي، مسير بيماريزايي ناشناخته و تنوع فنوتيپي بسيار پيچيده ارگانيسم در مواجهه با دستگاه ايمني ميزبان، بر مشكل شناسايي آن افزوده است. علاوه بر اين ، ابقا طولاني مدت باکتري در محل عفونت و وجود ناقلين بدون علامت، برنامه كنترل بيماري را با چالش روبرو كرده است.از اين رو، شناسايي و بكارگيري روشهاي تشخيصي و تفريقي گونههاي كلاستر مايكوپلاسما مايكوئيدس كه هركدام استراتژي جداگانه اي در برخورد با عفونت گلهها دارند، از اهميت ويژهاي برخوردار است. تعداد صفحات 176 word فهرست الف- مقدمهب-چکيده1- تاريخچه2- خصوصيات کلي مايکوپلاسما.............................................................. 63- مقاومت مايکوپلاسماها........................................................... 84- طبقه بندي مايکوپلاسماها................................................................... 95- طبقه بندي کلاستر مايکوئيدس................................................................. 126- فيلوژني ....................................................................... 147- ساختمان 151-7-ساختمان مايکوپلاسما مايکوئيدس ................................................. 152-7- ساختمان مايکوپلاسما کاپري کولوم ........................................................ 178- بيولوژي مولکولي.......................................................................... 199- تواليهاي تکراري............................................................. 2310- پروتئينهاي سطحي....................................................................... 2511- فاکتور حدت 3012- آناليز پروتئين ............................................................................. 3213- طبقه بندي سويهها .................................................................... 3414- مشخصات گونه مايکوئيدس...................................................... 3515- کشت و رشد گونه مايکوئيدس ................................................................................ 3816- کشت و رشد گونه کاپري کولوم ........................................................................ 411-16- محيط Thiacourt ....................................................................... 4117- بيماري پلوروپنوموني واگير گاوان................................................................. 441-17- علائم باليني ................................................................................. 452-17- علائم کالبدگشايي بيماري ........................................................................................................ 473-17- پاتوژنز 501-3-17- مکانيسمهاي مقابله با دستگاه ايمني............................................................................................ 534-17- اختصاصيت ميزبان..................................................................................... 575-17- انتقال بيماري ......................................................................................... 586-17- سير همه گيري ...................................................................... 591-6-17- مخزن 59...................................................................................2-6-17- راه انتقال................................................................... 597-17- پيشگيري و کنترل..................................................................... 601-7-17- اقدامات لازم براي حفاظت مناطق عاري از بيماري........................................................................... 612-7-17- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري.............................................................................................. 623-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي........................................................................................... 6318- بيماري پلوروپنوموني واگير بزان .................................................................................................. 631-18- علائم باليني .............................................................................. 642-18- علائم کالبد گشايي................................................................ 6619- گونه مايکوپلاسما کاپريکولوم کاپريکولوم........................................................ 691-19- سندروم MASKePs..................................................................... 702-19- علائم باليني.............................................................................. 713-19- علائم کالبد گشايي..................................................................... 714-19- سندروم آگالاکتيه واگير................................................................ 7320- گونه مايکوپلاسما کاپري .................................................................. 731-20- بيماريزايي ............................................................................ 732-20- علائم کالبد گشايي...................................................................... 7421- سير همهگيري.................................................................... 751-21-مخزن ....................................................................... 752-21-راه انتقال ...........................................................................3-21-جمعيت ميزبان........................................................................ 7722-پيشگيري وکنترل ..................................................................... 771-22- اقدامات لازم براي محافظت مناطق عاري از بيماري...................................... 772-22- اقدامات لازم هنگام شيوع بيماري....................................................................... 783-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومي................................................................... 7823-واکسن ......................................................... 791-23-واکسن MmmLC ............................................................................................................ 792-23-واکسن Mccp ..................................................................... 79 25-تشخيص افتراقي................................................................ 801-25-شناسايي عامل بيماري زا ........................................................ ...... 811-1-25-بررسي ميکروسکوپيک اگزوداي ريه از طريق تهيه اسمير يا برش بافتي............................ 812-25- تشخيص آزمايشگاهي ............................................................... 811-2-25- روش کشت و جداسازي......................................................... 811-1-2-25- انتخاب نمونه ها .................................................................... 822-1-2-25- آماده سازي نمونه ها .............................................................. 823-25- تستهاي بيوشيمي............................................................ 834-25- روشهاي سرولوژي.................................................................. 851-4-25- عوامل موثر در آزمايشات سرولوژي ...................................................... 852-4-25- تست مهاري رشد ....................................................................... 873-4-25- تست ايمونو فلورسانس .................................................................... 884-4-25- تست رسوب ژلي................................................................ ...... 885-4-25- تست فيکساسيون کامپلمان ..................................................... 896-4-25- تست ممانعت از هماگلوتيناسيون ..................................................................... 897-4-25- تست آگلوتيناسيون لاتکس................................................................... 908-4-25- تست اليزاي رقابتي.................................................................... 919-4-25- ساير تستهاي تشخيصي................................................................... 945-25 - مشکلات روشهاي سنتي.......................................................................... 946-25- تشخيص با استفاده از PCR....................................................... 95فصل دوم: روش کار26- روش کار 1011-26- جمع آوري نمونه ............................................................................ 1011-1-26- مواد لازم.................................................................................. 1012-1-26- بخش جمع آوري نمونه........................................................... 1013-1-26- نمونه برداري ......................................................................... 1032-26- کشت و جداسازي نمونه ها............................................................. 1041-2-26- مواد لازم ....................................................................... 1042-2-26- طرز تهيه محيط کشت اختصاصي براي جداسازي مايکوپلاسماي نشخوار کنندگان ................. 1061-2-2-26- مواد لازم ........................................................................ 1062-2-2-26- روش تهيه محيط کشت........................................................................... 1073-26- استخراج DNA مايکوپلاسما........................................................... 1091-3-26- روش استخراج DNA از نمونه هاي ارسالي................................................... 1094-26- فرايند PCR ............................................................. 1101-4-26- مواد لازم .............................................................. 1102-4-26- آماده سازي مواد جهت واکنش PCR ........................................................ 1121-2-4-26- افزوده سازي DNA نمونهها ..................................................... 1122-2-4-26- افزوده سازي DNA کلونيهاي جدا شده................................................. 1153-2-4-26- تهيه مخلوط اصلي اوليه.................................................................... 1153-4-26- پرايمرها.................................................................... 1154-26- واکنش PCR................................................................ 1175-26- تهيه ژل الکتروفورز .................................................................. 1181-5-26- طرز تهيه محلول اتيديوم برمايد .................................................... 1196-26- الکتروفورز .................................................................. 1217-26- رويت باندهاي ايجاد شده ..................................................................... 122 فصل سوم: نتايج27- نتايج ..................................................................... 1241-27- جداسازي 1241-1-27- بررسي عملکرد محيط کشت.................................................................. 1242-1-27- نتايج کشت نمونه هاي ارسالي ......................................................... 1241-2-1-27- نتايج روز پنجم ............................................................ 1252-2-1-27- نتايج روزهفتم تا دهم............................................................... 1253-2-1-27- نتايج روزپانزدهم............................................ 1262-27- نتايج PCR1-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر جنس ........................................ 1262-2-27- تائيد کلوني هاي جدا شده............................................ 1273-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر کلاستر مايکوئيدس........................ 1274-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه آگالاکتيه..................................... 1285-2-27- نتايج PCR نمونه ها با پرايمر گونه مايکوئيدس کلوني بزرگ..................... 1293-27- نتايج کالبد گشايي.......................................................................... 1301-3-27- معيار انتخاب .................................................................................. 130